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抽氣型厭氧罐操作全流程,從設(shè)備準(zhǔn)備到微生物培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)化指南

更新時(shí)間:2025-06-23 點(diǎn)擊量:67
  抽氣型厭氧罐通過真空抽吸與氣體置換技術(shù),為厭氧微生物培養(yǎng)提供穩(wěn)定無氧環(huán)境,廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)研究、臨床診斷及工業(yè)發(fā)酵領(lǐng)域。其操作需嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化流程,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性。以下從設(shè)備準(zhǔn)備、抽氣換氣、培養(yǎng)操作到結(jié)果分析,解析抽氣型厭氧罐的核心使用方法。
 

 

  一、設(shè)備預(yù)檢與培養(yǎng)基準(zhǔn)備
  1.罐體檢查:確認(rèn)罐體密封圈無破損,夾具滑動順暢,快速插拔接口無污漬。使用前用75%乙醇擦拭罐體表面,禁用酒精直接接觸罐蓋凹槽。
  2.培養(yǎng)基配置:選擇中性紅瓊脂或玉米醪瓊脂培養(yǎng)基,融化后冷卻至45℃±2℃,倒入無菌培養(yǎng)皿中,厚度約3mm。若使用一次性平皿,需選擇透氣性良好的材質(zhì)。
  3.指示劑與催化劑準(zhǔn)備:將美藍(lán)指示劑管、鈀粒催化劑管(140℃活化2小時(shí))及吸濕劑包(變色硅膠)放入罐內(nèi),用于監(jiān)測氧濃度與濕度。
  二、抽氣換氣操作
  1.裝罐密封:將接種有厭氧菌的平板正置放入罐內(nèi)支架,避免倒置導(dǎo)致平板脫落??焖傩o罐蓋夾具,確保定位桿與凹槽對齊,旋緊至阻力增大后微調(diào)即可。
  2.真空抽吸:連接真空泵與罐蓋抽氣接口,啟動真空泵,抽至負(fù)壓0.09-0.093MPa(680-700mmHg),用止血鉗夾緊橡膠管暫停抽氣。
  3.氣體置換:
 ?、俚?dú)鉀_洗:打開氮?dú)怃撈块y門,緩慢充氣至真空表歸零,關(guān)閉閥門并夾緊橡膠管,重復(fù)抽氣-充氣操作2-3次。
 ?、诨旌蠚怏w充入:按N2:CO2:H2=80:10:10(V/V)比例分步充氣。先充N2至0.021MPa,再充CO2至0.011MPa,最后用醫(yī)用氧氣袋灌裝H2充至零壓。H?需經(jīng)鈀粒催化與殘余O2反應(yīng)生成水,確保無氧環(huán)境。
  三、培養(yǎng)與監(jiān)測
  1.恒溫培養(yǎng):將厭氧罐置于37℃恒溫箱中,培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)菌種特性而定(如丙酮丁醇梭菌需5-7天)。
  2.氧濃度監(jiān)測:每24小時(shí)觀察美藍(lán)指示劑顏色變化,若指示劑保持無色,則證明無氧環(huán)境穩(wěn)定。
  四、結(jié)果分析與設(shè)備維護(hù)
  1.菌落觀察:培養(yǎng)結(jié)束后,取出平板觀察菌落形態(tài)。丙酮丁醇梭菌在中性紅平板上呈黃色菌落,需挑取典型菌落進(jìn)行鏡檢。
  2.罐體清潔:用中性清潔劑擦拭罐體,避免劃傷密封圈。定期涂抹無酸凡士林或硅酮油脂保養(yǎng)密封圈,延長使用壽命。
  抽氣型厭氧罐通過精準(zhǔn)的抽氣換氣操作,為厭氧微生物研究提供了可靠工具。嚴(yán)格遵循操作規(guī)程,可顯著提升實(shí)驗(yàn)成功率,助力微生物學(xué)與生物技術(shù)領(lǐng)域的發(fā)展。
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